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本试剂盒根据生物素与链霉亲和素具有很强亲和力的原理设计。在兔源或鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素化抗兔/鼠通用型二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了过氧化物酶(HRP)的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒适合与百奥莱博即用型或浓缩型抗体配套使用。

• 对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时最好用内源性生物素阻断剂进行封闭。
  
• DAB工作液现配现用，配制好的工作液2～8℃避光1小时内有效。
  
• 实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证完全覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。
  
• 为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。
  
• DAB为可疑致癌物，使用时请采取必要的防护措施。
  
• 本制品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。

• 常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。
  
  • 组织切片或细胞爬片染色前处理：
    
    • 石蜡切片
      脱蜡水化：60℃烤片1小时，二甲苯脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇(无水乙醇－无水乙醇－95%～85%～75%乙醇)和蒸馏水中各5分钟水化。
      
    • 冰冻切片和细胞爬片
      切片(或爬片)浸于0.01M pH7.4 PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%Triton X-100覆盖组织(或细胞)浸润15分钟，0.01M pH7.4 PBS洗涤2次×5分钟。
  • 石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。
    修复工作液配制：1L去离子水中加入10mL柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液，100×)，混匀即可。
    修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中(必需没过组织)，盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，从喷汽开始计时，1～2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS(0.01M pH7.4)漂洗2次，每次3分钟。
• 滴加适量Solution A，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
  
• 滴加适量Solution B，室温孵育10分钟，甩干。
  
• 滴加适量一抗工作液(商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体)，按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。
  
• 滴加适量Solution C，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
  
• 滴加适量Solution D，室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。
  
• DAB显色工作液配制：根据需要量，将DAB-A和DAB-B以1∶19的体积比混匀后即为DAB显色工作液。也可选择每毫升试剂B中滴加1滴(约50μL)试剂A，混匀即可。
  
• 显色：加适量的DAB显色工作液于需要显色的组织切片或细胞爬片上即可显色，显色时间一般为1～5分钟。显微镜下观察控制显色时间，当达到最佳显色效果后，自来水冲洗终止显色。显色后的切片经复染、脱水透明，封片后可长期保存。